Análise comparativa da intensidade de fluorescência de CD10 e de CD19 em blastos leucêmicos e hematogônias: A comparative analysis / CD10 and CD19 fluorescence intensity of leukemic blasts and hematogones

Hematogônias são células jovens normais da medula óssea responsáveis pela produção das células de linhagem B do sistema imunológico. A leucemia linfoblástica aguda de células precursoras B representa um dos tipos de transformação neoplásica destes precursores hematopoéticos. Devido à alta similaridade citológica das hematogônias e dos blastos leucêmicos, é possível haver erros de interpretação em suas análises, sendo importante, em algumas circunstâncias, o uso de técnicas complementares diagnósticas para diferenciá-las. Os antígenos CD10 e CD19 estão expressos em ambos os tipos celulares, e uma extensão no uso de outros marcadores é necessária para caracterização da natureza benigna ou maligna das células. Foram testadas possíveis diferenças nas curvas de expressão de CD10 e CD19 dos dois tipos celulares. Para o grupo em estudo, foram colhidas 39 amostras de pacientes portadores de LLA de linhagem B por ocasião do diagnóstico. A idade variou de 0 a 14 anos com uma média de 6,6 anos. Como grupo controle, foram também colhidas 36 amostras de medula óssea de pacientes pediátricos não portadores de neoplasia. A idade variou de 0 a 15 anos com uma média de 5 anos. Nos dois grupos, as diferenças nos gráficos das distribuições de intensidade de fluorescência (IF) de CD10 e CD19 foram analisadas quanto aos parâmetros: Média (ME), desvios-padrão (DP), coeficientes de variação (CV), coeficientes de inclinação (CI) e coeficiente de curtose (CC). Os valores individuais destes parâmetros de cada amostra foram comparados com os intervalos gerados pelo grupo controle: ME±2DP; ME±2,5DP e ME±3DP. Foi possível distinguir os dois grupos com 89,7 por cento e 75 por cento, 79,5 por cento e 100 por cento, 71,8 por cento e 100 por cento, de sensibilidade e especificidade para os respectivos intervalos. As expressões de CD10 e CD19 em blastos e hematogônias são diferentes, podendo ser de utilidade prática na distinção entre os dois tipos celulares.

Hematogones are normal immature cells from bone marrow that are responsible for the production of the immune system's B cell lineage. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) of precursor B cells represents one type of neoplastic transformation of hematogones. Due to their high similarity, there are risks of erroneous interpretation making the use of complementary diagnostic techniques necessary. CD10 and CD19 antigens are expressed on both types of cells so, the use of other monoclonal antibodies is necessary to identify their malignant or benign nature. In an attempt to avoid the use of different antibodies, we investigated possible differences in the expressions of CD10 and CD19 in both cell types. We collected 36 samples of bone marrow from non-neoplastic patients as a control group. The ages of the patients ranged from 0 to 15 years with an average of 5 years. Also 39 samples from patients with ALL of B cells were collected. The ages of these individuals ranged from 0 to 14 years with an average of 6.6 years. We analyzed the differences between the fluorescence in respect to average intensity, standard deviation, variation, inclination and kurtosis coefficients for the two markers. The individual values of each sample were compared with the intervals generated by the values of the control group: mean ± 2SD; mean ± SD and mean ± 3SD. It was possible to distinguish the groups with 89.7 percent and 75 percent; 79.5 percent and 100 percent and 71.8 percent e 100 percent of sensitivity and specificity, respectively for the three intervals. In conclusion, the expression of CD10 and CD19 antigens on blasts and hematogones are significantly different and may be useful in the differentiation of the two cell types.

Hematogônias: distinção com blastos da leucemia linfóide aguda de células B por citometria de fluxo / Hematogones: differentiation from B-lineage acute lymphoblastic leukemia by flow cytometry

Hematogônias são precursores normais de linhagem B que apresentam características morfológicas e, algumas vezes, imunológicas similares aos linfoblastos das leucemias linfóides agudas (LLA). O objetivo desse trabalho é realizar análise comparativa por citometria de fluxo, utilizando três cores, entre sub-populações de hematogônias e blastos da LLA-B, em crianças. O Grupo 1 constou de amostras de medulas ósseas, não neoplásicas, que apresentaram hematogônias identificadas pela microscopia óptica e o Grupo 2 de casos novos de LLA-B. O painel de anticorpos monoclonais utilizado era direcionado para: CD19, CD10, CD45, CD34, IgM, TdT e CD22. A análise das hematogônias, utilizando como parâmetro a intensidade de fluorescência de CD10 X CD45, mostrou três sub-populações representando células imaturas, intermediárias e maduras. A expressão dos marcadores CD34, IgM, TdT e CD22 reforçou esses achados. Os blastos leucêmicos se apresentaram formando uma única população, com expressão de positividade apenas para antígenos de imaturidade. Considerando não só a presença ou ausência de um determinado antígeno, mas sim a sua intensidade de expressão, verificamos que hematogônias e blastos apresentam perfis imunofenotípicos diferentes.

Hematogones are normal B-lineage cell precursors with morphologic and sometimes immunophenotypic, similarities to neoplastic lymphoblasts. The aim of this work is to compare using flow cytometry sub-populations of B-lineage cells: normal bone marrow precursors (hematogones) and lymphoblasts. Normal bone marrow from patients with hematogones observed by optical microscopy and new cases of acute lymphoblastic leukemia of B-cell precursors were included in the study. Antibodies directed against CD19, CD10, CD45, CD34, IgM and CD22 were used. Analysis of hematogones, using CD10 x CD45 fluorescence intensity as a parameter, showed three sub-populations: immature, intermediary and mature marker expressions. CD34, IgM, TdT and CD22 marker expressions reinforced these results. The leukemic blasts cells formed a single population with positive expression for only immature antigens. In conclusion, hematogones and blast cells demonstrated different immunophenotypic profiles. Hematogones exhibit a broad spectrum of immature, intermediary and mature cells in one sample and blast cells have essentially immature features.